Analiza calitativă a PCR pentru hepatita C

Hepatita este o boală gravă care are multe cauze. Baza dezvoltării sale este afectarea directă sau indirectă a ficatului. Având în vedere importanța sa pentru întregul organism, se poate ghici doar cât de dificilă este patologia. În acest articol vom examina în detaliu caracteristicile cursului și diagnosticul de laborator al hepatitei C.

Cauza bolii este un agent viral care se referă la agenții patogeni care conțin ARN. Are o trăsătură distinctivă - abilitatea de a muta, adică de a-și schimba structura. Datorită acestui fapt, infecția scapă de atacul sistemului imunitar și, în cele mai multe cazuri, duce la inflamația cronică a ficatului.

Având în vedere existența diferitelor subtipuri ale virusului, selecția medicamentelor ar trebui să se bazeze pe rezultatele genotipării. În ciuda unui studiu lung al bolii și a caracteristicilor structurii VHC, nu a fost încă posibil să se dezvolte un vaccin specific pentru boală.

Dificultățile de diagnosticare precoce se află în cursul asimptomatic al hepatitei, în urma căruia o persoană vizitează un medic în stadiul cirozei. Pentru a detecta o boală în timp, sunt necesare examinări medicale regulate. Numai prin testarea în laborator a sângelui este posibil să se detecteze VHC și să se prevină infecția celor din jurul vostru. Faptul este că purtătorul de infecție poate pentru o lungă perioadă de timp să nu ghicească despre patologie și să continue să transmită virusul oamenilor sănătoși.

Modalități de transmitere

În cele mai multe cazuri, virusul se răspândește prin sânge, deoarece conține cea mai mare concentrație de agenți patogeni. Astfel, infecția este transmisă:

• cu hemodializă;
• cu un ac infectat;
• în procesul de luptă, când pielea este rănită și apare contactul cu sângele;
• cu transfuzie de sânge (transfuzie de sânge).

Probabilitatea infectării în timpul intimității este nesemnificativă, deoarece există un număr mic de agenți patogeni la nivelul materialului seminal și al descărcării vaginale. Riscul de infectare este semnificativ crescut prin încălcarea integrității membranei mucoase a organelor genitale. Acest lucru este observat la sexul agresiv și anal.

În ceea ce privește modul vertical de transmisie, aceasta se desfășoară în procesul de muncă. În perioada de gestație a fătului, agentul patogen nu poate pătrunde prin placentă la embrion. La nașterea naturală, agentul patogen este transmis copilului prin traumatizarea pielii acestuia, când se observă contactul cu sângele mamei.

După penetrarea agentului patogen într-un organism sănătos, începe sinteza anticorpilor, care sunt protecția împotriva infecției și aparțin structurilor imune. Ele se regăsesc în studiul inițial al unei persoane care utilizează metoda ELISA.

Pentru a confirma diagnosticul, pacientul este supus unei reacții în lanț a polimerazei. Este o analiză a materialului genetic al agentului patogen și determinarea încărcăturii virale.

Diagnosticul de laborator al hepatitei C

Diagnosticul de laborator începe cu o teste imunoenzimatică. Principala sa sarcină este de a detecta anticorpii produși împotriva agentului patogen. Eficiența sa este de aproape 95%. Datorită acestei cercetări, este posibilă identificarea transportatorului de virusuri în stadiul preclinic și trimiterea acestuia pentru examinare ulterioară.

O analiză calitativă a ELISA indică prezența sau absența imunoglobulinelor în sângele pacientului. Rezultatul său poate fi "pozitiv" sau "negativ". Primind primul răspuns, persoana este trimisă pentru următoarea examinare - PCR. Prețul acestuia depinde de calitatea reactivilor și a laboratorului. Costul reacției în lanț a polimerazei poate ajunge la 4 mii de ruble.

Elementele PCR

Folosind o reacție în lanț a polimerazei, chiar și o cantitate mică de material biologic ne permite să estimăm încărcătura virală din sânge, adică să calculăm concentrația agenților patogeni într-un mililitru de lichid.

Odată cu apariția PCR, diagnosticul de hepatită a devenit mult mai ușor. Analiza face posibilă identificarea ARN VHC, stabilirea stadiului procesului infecțios și a infecțiozității purtătorului de virus.

Există mai multe tipuri de diagnostic genetic:

1. Analiza calitativă a PCR pentru hepatita C - confirmă prezența sau absența VHC în sângele subiectului:
2. cantitative, prin care puteți calcula concentrația de viruși și stabili stadiul bolii. Rezultatul este dat în UI / ml sau în copii / ml (în funcție de laborator);
3. genotiparea - necesară pentru a determina genotipul VHC. Acest lucru este necesar pentru o selecție exactă a medicamentelor care vor fi cele mai eficiente în acest caz. Analiza indică indirect severitatea procesului patologic din ficat. Astfel, în cel de-al treilea genotip al agentului patogen, cel mai adesea se observă steatoza, care are la bază acumularea de grăsimi în hepatocite (celulele sale). În plus, tipul de virus afectează rezultatul și durata cursului terapeutic.

Analiza calitativă a PCR pentru hepatita C

În primul rând, materialul biologic este examinat în laborator pentru prezența ARN-ului HCV. Este important să ne amintim că o analiză calitativă a hepatitei C are un anumit nivel de sensibilitate și, prin urmare, nu poate da întotdeauna răspunsul corect. În acest caz, se recomandă reanalizarea diagnosticării de laborator utilizând alți reactivi.

Pentru a obține rezultate fiabile, ar trebui utilizate sisteme de testare cu o sensibilitate de cel puțin 50 UI / ml.

Rezultatul diagnosticului poate fi "pozitiv" sau "negativ". Dacă agentul patogen nu este găsit în sânge, studiul este finalizat. Dacă este detectat un agent patogen în probă, se cuantifică o încărcătură virală.

Un răspuns fals negativ este obținut atunci când procesul este încălcat, de exemplu, componente active care suprimă construirea de copii ale agentului patogen intră în mediu. Astfel, nu este posibil să se afișeze o imagine reală a sângelui, motiv pentru care infecția unei persoane nu este diagnosticată.

Un rezultat pozitiv fals poate fi obținut dacă tubul pentru colectarea materialului biologic, precum și mediul pentru studiu au fost contaminate. În plus, un astfel de răspuns de analiză este posibil atunci când infecțiile mixte, atunci când ficatul este afectat de mai mulți viruși, de exemplu hepatita C și D.

Indicatii pentru cercetarea calitativa

Medicul poate prescrie unui pacient un studiu calitativ privind identificarea ARN-ului virusului hepatitei C:

• după primirea unui răspuns imunologic pozitiv sau dubios în enzimă;
• pentru verificarea diagnosticului;
• determină încărcătura virală;
• stabilirea stadiului bolii;
• diagnosticul de infecție mixtă. Hepatita C infectează frecvent ficatul simultan cu virusul "D";
• determinarea tacticii terapeutice ținând cont de genotipul agentului cauzal;
• evaluarea dinamicii schimbărilor în timpul tratamentului cu medicamente antivirale.

Avantajele reacției în lanț a polimerazei includ:

1. sensibilitatea ridicată a tehnicii, care permite stabilirea faptului de infectare în stadiul preclinic;
2. identificarea materialului genetic al agentului patogen și nu a anticorpilor acestuia;
3. posibilitatea de a stabili un subtip al unui agent patogen;
4. rata de diagnosticare ridicată, deoarece nu este necesară însămânțarea materialului pe mediul nutritiv și este suficient să se utilizeze sisteme specifice de testare. O persoană obține rezultatul după 5 ore;
5. versatilitate. Analiza permite identificarea oricărui material genetic (ARN, ADN). Datorită acestui fapt, medicul poate confirma hepatita C și alte tipuri de boală (B);
6. capacitatea de a detecta infecții latente.

Cercetare cantitativă

În studiul sângelui utilizând reacția în lanț a polimerazei se poate calcula numărul de agenți patogeni într-un volum fix de material biologic. Indicatorul este prezentat în UI / ml. Prin analiză, este posibil să se determine gradul de contagiune al pacientului, să se determine stadiul procesului infecțios și, de asemenea, să se evalueze eficacitatea terapiei medicamentoase.

Pe baza PCR, specialistul decide care doze de medicamente pot bloca reproducerea agenților patogeni. În plus, durata tratamentului antiviral și prognoza pe viață sunt determinate. Este important să ne amintim că sistemele de testare au o sensibilitate ridicată, prin urmare, metoda permite confirmarea infecției unei persoane în stadiul preclinic.

genotipare

Având în vedere capacitatea mutației patogenului, genotipul său este necesar pentru a determina tactica tratamentului și alegerea medicamentelor antivirale. De exemplu, tratamentul cu HCV 1 durează 48 săptămâni, cu o tendință pozitivă observată doar în 60% din cazuri. Genotipurile 2 și 3 au un prognostic mai favorabil. Medicamentele antivirale sunt prescrise timp de 8 luni, iar eficiența acestora atinge 85%.

Potrivit statisticilor, în majoritatea cazurilor, VHC 1, 2 și 3 sunt înregistrate în Federația Rusă.

Când se descifrează un test de laborator, acest răspuns poate fi indicat - "nu este tastat". Acest lucru înseamnă că un virus circulă în sistemul circulator al pacientului și nu poate fi recunoscut de sistemul de testare. Rezultatul analizei în acest caz indică faptul că agentul patogen nu este tipic pentru o anumită zonă geografică.

Cum se obțin rezultate fiabile?

Pentru ca un studiu calitativ al PCR să detecteze ARN-ul agentului cauzal al hepatitei C a arătat rezultatele corecte, este necesar să se respecte cerințele pentru pregătirea pentru diagnosticarea de laborator:

1. prelevarea de probe de sânge se face pe stomacul gol, iar diferența de "foame" nu trebuie să fie mai mică de 8 ore;
2. cu două zile înainte de studiu, se recomandă oprirea consumului de băuturi alcoolice și abandonarea preparatelor picante, grase și afumate;
3. anulează introducerea de medicamente care reduc coagularea sângelui, de exemplu, heparina. Dacă aceste medicamente sunt prescrise din motive de sănătate, trebuie să-i informați pe medic. În plus, specialistul trebuie să fie conștient de admiterea altor medicamente care pot afecta rezultatul cercetărilor de laborator;
4. În ajunul colectării materialului biologic, procedurile fizioterapeutice nu ar trebui să fie efectuate și ar trebui să fie supuse unei eforturi fizice severe.

Rezultatele analizei pot fi influențate nu numai de persoana care dă sânge, ci și de alți factori, și anume:

• proba de sânge de slabă calitate;
• nerespectarea recomandărilor privind transportul materialului biologic;
• instruirea insuficientă a lucrătorilor de laborator;
• nerespectarea tehnicii de cercetare;
• introducerea anticoagulantelor (heparinei) în ajunul prelevării de probe de sânge. Acest grup de medicamente reduce coagularea, încetinind astfel activitatea reactivilor.

În laboratoarele diferite, răspunsul diagnostic poate diferi ușor, însă aceste erori nu afectează rezultatul final al studiului.

O atenție deosebită se acordă tipurilor de sisteme de testare utilizate în laborator. Adesea se preferă reactivii cu sensibilitate ridicată. Acest lucru este important pentru pacienții cu sarcină virală scăzută, deoarece este dificil de detectat.

Cât de des este efectuat un test de laborator?

Reacția în lanț a polimerazei primare este efectuată la persoanele care au fost detectate prin imunoteste pentru anticorpi la patogenul hepatitei. În acest caz, acesta este însărcinat să confirme infectarea unei persoane și să stabilească stadiul bolii. În plus, analiza permite determinarea subtipului virusului, care este deosebit de important pentru alegerea medicamentelor.

Următoarea perioadă pentru testarea obligatorie a laboratorului este de 3 luni de la începerea terapiei antivirale. Diagnosticarea face posibilă evaluarea eficacității medicamentelor, reglarea dozei sau înlocuirea acestora.

În plus față de testele de bază, PCR poate fi efectuat suplimentar la 4 și 24 de săptămâni de la începerea tratamentului. O prognoză pozitivă a bolii este confirmată de o scădere a încărcăturii virale după trei luni de tratament. De exemplu, ar trebui să scadă de la 1 milion UI / ml la câteva sute de mii.

Dacă concentrația agenților patogeni din sânge rămâne la același nivel sau crește ușor, aceasta indică ineficiența agenților antivirali și necesită înlocuirea acestora. Folosind PCR la sfârșitul tratamentului, este posibilă confirmarea recuperării pacientului.

Pentru a interpreta corect rezultatele diagnosticului de laborator, este necesară consultarea unui specialist în hepatologie sau boală infecțioasă. Având în vedere frecvența ridicată a răspunsurilor false în ELISA, analiza este utilizată exclusiv pentru screening-ul primar. Pentru o examinare mai amănunțită a pacientului, sa utilizat reacția în lanț a polimerazei.

Analiza Pro a PCR pentru virusul hepatitei C

Hepatita C este o afecțiune hepatică gravă pentru orice persoană. Patologia este cauzată de flavivirusul HCV, în structura căruia este prezentă molecula ARN, care poartă codul genetic general al virusului.

Patologia poate fi de diferite forme, totul depinde direct de starea generală a persoanei și de caracteristicile fiecărui organism individual.

Această structură face posibilă analizarea PCR pentru prezența în organism a unui virus din categoria hepatitei C.

Vă permite să identificați în timp util un virus periculos pentru oameni, să urmați un tratament de droguri și să restaurați sănătatea, protejând corpul de distrugerea ficatului.

Virusul VHC se poate manifesta, atat in forma acuta - periculoasa, cat si in cea cronica. Dacă o persoană la un moment dat a detectat acest virus, trebuie să fie atribuită analizei PCR.

De ce este efectuată analiza PCR?

Pe baza rezultatelor analizei, medicul va putea să elaboreze un regim de tratament.

Analiza medicală de laborator a PCR pentru hepatita C este un studiu al materialului biologic utilizat pentru a determina virusul flava. Studiul se referă la reacția în lanț a polimerazei.

Acesta prezintă valoarea cantitativă totală a leziunii virale, proprietățile sale calitative și este de asemenea posibil să se determine genotipul virusului care conține ARN.

Este important! Pe baza acestei analize medicul determină metoda, tipul de terapie și durata acesteia. De asemenea, prin analiză, este posibil să se determine factorul epidemiologic general, și anume nivelul riscului de transmitere a bolii la alți transportatori.

Analiza în medicina modernă se mai numește și analiza ARN. Motivul este că inerentul flavavirusului hepatitei C este compus dintr-o particulă de ARN, a cărui mărime este de aproximativ 30-60 nm. Una dintre trăsăturile caracteristice ale acestui virus este o anumită tendință de mutație.

Fiecare subspecietate sau genotip prezent are o varietate de rezistență. Această circumstanță devine baza diverselor metode de cercetare și tratament a bolii, precum și o prognoză ulterioară cu o terapie bine dirijată.

Cum se face

Analiza se realizează strict pe stomacul gol, adică înainte de micul dejun se administrează sânge venos. Metoda de testare este realizată prin PCR Real-Time sau extrem de sensibilă de diagnosticarea standardelor moderne, care se realizează în timp real.

Limita inferioară de detectare în acest caz este de 15 UI / ml. Analiza se realizează strict utilizând sisteme automate închise. Hepatita C poate fi determinată utilizând teste precum COBAS AMPLICOR cu un nivel de sensibilitate generală de 50-100 UI / ml.

Este important! Toate tipurile de cercetări moderne de laborator similare sunt efectuate pe baza luării în considerare a unui anumit prag de sensibilitate.

Vorbim despre capacitatea reactivului utilizat pentru a detecta nivelul minim al capacității reactivului de a determina virusul în materialul biologic studiat. Dacă nu există nici o boală în organism, rezultatul studiului va arăta ca "nu a fost găsit".

Imaginea prezintă un circuit de analiză PCR:

Tipuri de analiză PCR și rezultatele acesteia

Dacă aveți cele mai multe maladii și dureri în domeniul cookie-urilor, trebuie să consultați imediat un medic care va efectua un studiu aprofundat. Analiza PCR pentru hepatita C se bazează pe trei puncte principale:

1. Analiza cantitativă.
2. Analiza calitativă.
3. Genotipare.

Testele efectuate oferă o oportunitate de a determina și de a identifica natura exactă a viremiei și a diferitelor simptome planificate genetic ale prezenței agentului patogen. În proporție directă cu sensibilitatea, din sistemul de diagnosticare efectuat, cercetarea medicală poate fi efectuată o singură dată, precum și o confirmare.

Acest lucru trebuie făcut pentru a clarifica rezultatele obținute anterior și este utilizat în acest caz de un reactiv mai sensibil.

PCR de înaltă calitate

O analiză calitativă pentru PCR este un alt nume pentru un studiu, cum ar fi reacția în lanț a polimerazei. Cu sensibilitatea standard a testului, care permite determinarea prezenței unui microb viral, indicatorii vor fi în intervalul 10-500 UI / ml.

Cu o analiză negativă a bolii, analiza va arăta că nivelul de concentrație totală din sângele pacientului va fi cu un ordin de mărime mai mic decât pragul general de susceptibilitate pentru sistemul de diagnosticare.

Dacă a fost obținut un răspuns "nedetectat" în timpul PCR de calitate, pentru tratamentul ulterior, va trebui să cunoașteți pragul total de sensibilitate al reactivului. În ceea ce privește răspunsul pozitiv, în timpul analizei PCR, acesta poate fi obținut deja în a 4-a zi după infectare. Fracțiile standard de proteine ​​la flavavirusurile stabilite pot apărea mult mai târziu.

Schema generală a analizelor PCR poate fi prezentată după cum urmează:

PCR cantitativ

PCR cantitativ este un indicator special al încărcăturii virale produse, care reflectă nivelul general al concentrației de ARN de virus în corpul uman. Acest indicator arată cantitatea de enzime ARN virală care este prezentă pe centimetru cub care este luată din vena sanguină.

Rezultatele acestui studiu în sistemul de cercetare medicală sunt notate în unități de un mililitru. Pe certificatele emise în mâini, acest indicator poate arăta ca 1,7 milioane sau 1,700,000 UI / ml.

Analiza cantitativă PCR este atribuită acelor pacienți înainte de efectuarea terapiei antivirale. A doua oară se desfășoară în a 12-a săptămână de tratament, ceea ce vă permite să evaluați corect rezultatele tratamentului cu hepatita C. Cu alte cuvinte, analiza face posibilă determinarea unor parametri importanți precum:

1. Nivelul de infectivitate, adică gradul de risc al transmiterii microbiene de la o persoană infectată la o persoană sănătoasă, este determinat. Cu cât concentrația ARN-ului flavavirus este mai mare, cu atât este mai mare probabilitatea de infectare a unei alte persoane, ceea ce este important în relațiile sexuale.
2. Nivelul general de eficacitate și metoda de tratament aleasă.
3. Aceasta este o oportunitate ideală pentru a determina durata și prognoza terapiei antivirale. De regulă, cu cât încărcătura este mai mare, cu atât tratamentul va dura mai mult.

Merită să știți că PCR cantitativ depinde de tipul specific de test de laborator și de pragul de sensibilitate. Limita inferioară a standardului stabilit este indicatorul care nu atinge 600.000 UI / ml.

Media este cuprinsă între 600.000 și 700.000 UI / ml. Dacă rezultatele au fost obținute peste 800.000 UI / ml, medicul determină imediat un nivel ridicat de concentrație a unei substanțe, cum ar fi ARN, cu un virus prezent în compoziție.

Este important! Relația directă dintre nivelul ARN HCV și severitatea bolii sugerează că acest virus este prezent în compoziția sângelui general și notează, de asemenea, complexitatea patologiei. Pacientul poate avea o încărcătură virală suficient de mare. În plus, această relație indică o deteriorare destul de gravă a celulelor.

genotipare

Datorită activității de mutație relativ înalte a VHC în natură, în cursul testelor efectuate, este posibil să se determine modul în care tipul de virus este prezent în sângele unei persoane bolnave. În medicina modernă sunt cunoscute 11 genotipuri ale unui virus, cum ar fi hepatita C. Acesta include un număr destul de mare de subtipuri sau subtipuri diferite.

Tipurile 1, 2 și 3 sunt cunoscute și comune în Rusia. În general, genotiparea este un element foarte important al analizei efectuate. Prin aceasta, medicul înțelege nivelul de rezistență sau rezistența patologiei la medicamentele selectate.

Aproape întotdeauna, pe baza acestei analize, se construiește un tratament viitor. Acest lucru este important deoarece există reguli de tratament, cum ar fi:

Analiza calitativă pentru hepatita C

8 martie 2017, 12:29 Articole de specialitate: Nova Vladislavovna Izvchikova 0 10.547

O analiză calitativă a reacției în lanț a polimerazei - PCR pentru hepatita C determină prezența sau absența VHC în organism. În condiții de laborator, se investighează structura ARN, care va include virusul. În cazul detectării virusului C, este necesar să se efectueze un curs de tratament, deoarece starea neglijată a ficatului va avea consecințe grave. PCR de înaltă calitate se realizează după recuperare pentru a confirma absența anticorpilor. Numit și pentru inspecția de rutină. Cu o concentrație scăzută a agentului cauzal în sânge, PCR (calitativ) nu poate detecta nimic, deoarece sistemul de diagnosticare are propriile praguri de sensibilitate. În cazul stadiului inițial al bolii sau al formei ușoare, PCR este efectuat prin ultradiagnostic pe echipamente ultrasensibile.

Ce este virusul ARN?

Termenul ARN al virusului hepatitei C (sau al virusului hepatitic C virus) este boala hepatică în sine. Virusul C se leagă de celula sănătoasă a corpului prin penetrarea în interior. În timp, răspândit în tot corpul, este necesar doar pentru a intra în sânge. Ca urmare, agentul patogen penetrează ficatul, se fixează cu celulele sale și lucrează din greu. Celulele hepatice (hepatocite) funcționează sub influența sa, suferă modificări și, din acest motiv, mor. Cu cât virusul C este mai lung în ficat, cu atât numărul celulelor este mai mare. În timp, se dezvoltă boli periculoase, ducând la degenerare malignă și moarte.

Infecția ficatului cu acest tip de virus nu se poate manifesta pe plan extern. Timp de mulți ani sau zeci de ani, o persoană infectată se simte complet sănătoasă și doar o examinare aleatorie deseori dezvăluie patologia. Când se dă sânge pentru hepatită, se examinează o parte a lanțului de ARN (acid ribonucleic), care face parte din gena umană (ADN). Rezultatele testelor de laborator nu ar trebui utilizate pentru auto-tratament, deoarece acesta este doar un indicator. Imaginea exactă și diagnosticul suplimentar sunt mai bine determinate de medic.

Când se face: indicații pentru cercetare

În confirmarea VHC se efectuează analiza PCR (reacția în lanț a polimerazei). Studiile PCR ajută la găsirea agentului cauzal în structura ARN și prescriu o terapie eficientă. Numit în următoarele cazuri:

• detectarea semnelor de inflamație a ficatului;
• studii de screening pentru prevenire;
• examinarea persoanelor aflate în contact;
• diagnosticul de hepatită de origine mixtă (determinarea principalului agent patogen);
• determinarea nivelului activității de reproducere a virusului în forma cronică;
• ciroza hepatică;
• pentru a determina eficacitatea tratamentului prescris.

PCR de cercetare prescrie un medic pentru a determina eficacitatea cursului de tratament al hepatitei.

Există o analiză atât calitativă, cât și cantitativă a PCR. PCR cantitativ arată procentul de ARN cu purtători de virus în sânge și calitativ indică prezența sau absența virale. Un indicator pozitiv al calității (prezența ARN-ului de hepatită C) necesită și o cercetare cantitativă. Un nivel ridicat de concentrație a agentului cauzal al hepatitei C este asociat cu riscul transmiterii sale, adică a infecției altor persoane. Numerele mici sunt mai bine tratabile. Cantitatea de virusuri ARN din sânge nu este legată de intensitatea bolii. Analiza PCR este de asemenea efectuată în cazul terapiei cu interferon pentru a prescrie durata și complexitatea cursului de tratament.

Caracteristicile analizei PCR de înaltă calitate pentru hepatita C

Numit de analiză calitativă cu indicele de reacție în lanț a polimerazei, toți pacienții care au avut anticorpi in sange pentru hepatita C, care a fost bolnav și recuperate, ar trebui să re-ia un test. Este recomandat pentru a obtine testate pentru hepatita B și, apoi, în cazul unei concluzii pozitive și hepatita D. De asemenea, analiza calitativă prin reakatsiya trebuie efectuate împreună cu alte teste de sânge. Analizele vor arăta o imagine completă a răspândirii virale.

Din rezultatele testului, doar un test pozitiv pentru hepatita C va fi vizibil sau negativ, adică prezența sau absența unui virus. Dacă ieșirea este "detectată", virusul este și continuă să fie activ. Denumirea "nedetectată" indică absența unui virus sau cantitatea sa mică. Cu acest indicator ar trebui să ia în considerare faptul că sensibilitatea analitică a sistemelor de diagnostic și ARN diferite hepatita C poate fi încă în sânge, dar nu apare în analiză.

O metodă PCR deosebit de sensibilă dezvăluie ultra-hepatita C chiar și în cantități mici. Se utilizează un studiu de hibridizare cu fluorescență, care este de multe ori mai mare decât sistemele standard PCR. Metoda este utilizată în mai multe cazuri:

• presupuse forme ascunse de hepatită C;
• Diagnosticarea PCR nu a confirmat patogenul, dar există anticorpi;
• în cazul recuperării;
• pentru a detecta infecția precoce.

Înapoi la cuprins

Analiza decodificării

Decodificarea PCR a VHC afectează decizia finală atunci când face un diagnostic, în special cu metoda ultrametod. Principalul dezavantaj al acestui studiu este aderența strictă la condițiile sterile pentru eșantion și materiale. O ușoară abatere uneori prezintă concluzii analitice inexacte, complică diagnosticul și tratamentul ulterior. Analiza PCR pentru determinarea ARN-ului hepatitic nu prezintă întotdeauna cu încredere o imagine a bolii, uneori inexactități sunt permise și în ambele direcții.

Diagnosticarea virusului hepatitei, se recomandă utilizarea unui examen cuprinzător.

Norma indicatorilor

Absența anticorpilor JgM la hepatita virală C în rezultatele studiului este considerată normă în analiza reacției în lanț a polimerazei. În același timp, rezultatele analizei serologice indică prezența anticorpilor la virusul C și acest lucru este, de asemenea, în limitele normale. O definiție calitativă nu indică intensitatea bolii, ci doar dezvăluie agentul cauzator al hepatitei C în ARN. Această analiză se repetă după tratament pentru a confirma recuperarea efectivă.

abateri

Dacă sunt prezenți anticorpi JgM la ARN VHC, aceasta indică o infecție în curs de dezvoltare. Boala în același timp se desfășoară acut sau cronic, manifestată în diferite etape. Dacă se înregistrează o scădere a numărului de anticorpi, analiza va indica faptul că rezultatele tratamentului au fost obținute în timpul recuperării. Există cazuri extrem de rare de constatări fals pozitive în diagnosticare. Acestea se găsesc la femei în timpul sarcinii și la persoanele cu alte boli infecțioase.

Analiza PCR pentru hepatita C

Pentru diagnosticul de "hepatită virală cronică C (CVHS)" este necesară o examinare completă a persoanei, care include studii clinice, de laborator și instrumentale. Important din punct de vedere al diagnosticului pentru diagnosticul corect este metoda PCR - reacția în lanț a polimerazei.

Ce arată această analiză și de ce este necesar?

Această metodă de laborator detectează ARN-ul virusului hepatitei C în sângele uman. Împreună cu testul imunosorbant legat de enzime (ELISA) pentru anticorpi împotriva virusului, PCR este utilizat pentru a face un diagnostic al CVHC și a genotipului său patogen. Această cercetare este una dintre cele mai noi metode de diagnosticare de laborator. Fiabilitatea sa la CVHS depășește 97%, ceea ce este considerat un indicator foarte bun pentru cercetare.

Există trei teste de sânge PCR pentru CVHS: genotipări calitative, cantitative și viruși. Primul studiu (analiza calitativă) a virusului îl detectează în sânge și, prin urmare, este utilizat doar pentru diagnosticare.

Al doilea studiu (cantitativ) determină gradul de încărcare virală pe corp, prin urmare, este utilizat pentru a monitoriza eficacitatea terapiei.

Al treilea PCR (genotipare) clarifică diagnosticul, stabilind genotipul virusului, ceea ce este foarte important pentru numirea corectă a tratamentului antiviral.

Esența tehnicii de reacție în lanț a polimerazei este utilizarea enzimelor care înmulțesc materialul genetic al agentului patogen în biomaterial. În procesul de replicare, tubul cu sânge este încălzit de mai multe ori și răcit la temperatura necesară pentru accelerarea reacției enzimatice. Ca urmare a acestor manipulări, cantitatea de genom viral crește de mai multe ori, permițându-i să fie detectată chiar și cu o cantitate minimă.

Diagnosticarea PCR are multe avantaje față de alte teste de laborator:

• sensibilitate ridicată - 97-98%;
• specificitate analitică garantată (dezvăluie exact agentul patogen pe care doriți să îl găsiți, și nu tulpina acestuia);
• viteza de conducere (nu durează mai mult de 2 zile pentru a obține o concluzie).

Trei tipuri de teste PCR

Analiza PCR de înaltă calitate este atribuită tuturor pacienților în care analiza ELISA a detectat anticorpi împotriva virusului HVGS. După efectuarea PCR de înaltă calitate, pot fi obținute două opțiuni de răspuns: "ARN-ul este detectat" sau "ARN-ul nu este detectat". Pentru a detecta cantitatea minimă de virus în sânge, sunt necesare sisteme de testare cu o sensibilitate de cel puțin 50 UI / ml. Dacă concentrația virusului în sângele pacientului este mai mică decât cea determinată de diagnostic, rezultatul studiului poate fi fals negativ. Pentru a evita o astfel de eroare de diagnosticare, laboratoarele care efectuează diagnosticarea PCR trebuie să dispună de sisteme de testare foarte sensibile. În laboratorul "Invitro" se utilizează, de exemplu, teste cu sensibilitate de 15 UI / ml. Lucrătorii din laboratoare sunt obligați să furnizeze informații despre sensibilitatea testelor la pacienți și la medici, la prima lor solicitare.

Analiza cantitativă a PCR determină gradul de viremie, adică concentrația patogenului din sânge, încărcătura virală. Rezultatul acestui studiu, spre deosebire de PCR de înaltă calitate, este exprimat în numere, de exemplu 2 × 10 * 6 UI / ml, ceea ce înseamnă 2 milioane de unități internaționale în 1 ml de sânge. Unele laboratoare utilizează un alt indicator - numărul de copii / ml. Acești doi indicatori sunt ușor de convertit: 1 unitate internațională este egală cu 4 copii de ARN. Astfel, 2 x 10 x 6 UI / ml va însemna că 8 x 10 x 6 copii de ARN viral în 1 ml, adică 8 milioane de exemplare în 1 ml de sânge.

Genotiparea este definiția uneia dintre cele șase genotipuri ale unui virus. Imaginea clinică, rata de dezvoltare a complicațiilor hepatice și prognosticul pentru viața viitoare a pacientului depind de genotipul agentului cauzal. Genotipul virusului este foarte important deja în stadiul diagnosticului, deoarece combinația de medicamente și durata cursului terapeutic care urmează a fi atribuită pacientului depind de determinarea sa corectă.

Cu toate acestea, chiar și această cercetare de laborator aparent "perfectă" are dezavantaje:

• studiul replică materialul genetic al tuturor agenților patogeni, chiar și cei care nu trăiesc, ceea ce poate distorsiona rezultatul. Prin urmare, pentru a monitoriza eficacitatea cu ajutorul PCR, reanalizarea este efectuată nu mai devreme de 2 luni de la cea precedentă, astfel încât virusii morți pot "părăsi" organismul pacientului;
• o parte a genomului viral, care este determinată folosind sisteme de testare, poate fi prezentă teoretic în alte virusuri sau microorganisme, astfel încât există o posibilitate de răspuns fals pozitiv;
• virușii se mută repede. Uneori viteza și amploarea mutației virale este atât de mare încât sistemul de testare nu mai atinge genomul. Ca urmare, este posibil un rezultat negativ fals.

Pentru a rezolva aceste neajunsuri, producătorii de sisteme de testare de laborator pentru diagnosticarea PCR efectuează în mod constant testele lor, inclusiv reacțiile încrucișate și sensibilitatea la un anumit genotip al virusului.

Cum se face un test PCR pentru hepatita C?

Pentru ca încheierea unui examen PCR să fie fiabilă, este necesar să se respecte cu strictețe regulile de pregătire pentru comportamentul său:

• studiul se desfășoară pe stomacul gol (glucoză, grăsimi, minerale care intră în sânge din alimente, pot afecta viteza și calitatea reacției enzimatice);
• decalajul dintre ultima masă și prelevarea de probe de sânge pentru analiză trebuie să fie de cel puțin 8 ore;
• în ajunul studiului este interzisă consumul de alcool și consumul de alimente grase, perioada de eliminare a cărora este prelungită;
• o zi înainte de a merge la laborator ar trebui să evite stres fizic și emoțional puternic;
• până când nu se recomandă să se fumeze.

Pentru a evita apariția unor concluzii false, presupusul pacient trebuie să vină la laborator puțin mai devreme decât sângele va fi luat. Este nevoie de 15-20 de minute pentru ca o persoană să-și prindă respirația, să se calmeze. Adrenalina, care este prezentă în sânge după o plimbare rapidă, poate afecta rezultatul examinării.

Dacă pacientul vizat pentru analiză ia medicamente, el trebuie să informeze medicul despre acest lucru. Este posibil ca unele dintre ele să fie refuzate de ceva timp (dacă este posibil).

Rezultatul analizei PCR pentru hepatita C

Decodarea rezultatelor implicate în medicul de laborator al laboratorului care a efectuat analiza. Decodificarea este determinarea deviației rezultatului obținut din normă. Rata indicatorilor este stabilită direct de producătorul sistemului de testare, care este utilizat de laboratorul de diagnosticare. Prin urmare, nu este surprinzător faptul că, în unele laboratoare, încărcătura virală este determinată în UI / ml, iar în altele în copii / ml.

După ce am obținut concluzia, este necesar să o putem interpreta corect. Tratamentul rezultatelor studiului trebuie efectuat de către medicul curant al pacientului cu hepatită C. Doar după o examinare obiectivă, instrumentală și de laborator a pacientului, medicul poate obține o cantitate suficientă de date pentru interpretarea corectă a rezultatelor PCR obținute.

Evaluarea analizei calitative, ca regulă, nu cauzează dificultăți, chiar și la pacienți. Rezultatul poate fi unul singur: "detectat" sau "nu a fost detectat". În acest caz, a doua este norma.

Indicatorii de analiză cantitativă sunt mai dificil de interpretat. Acesta arată gradul de încărcare virală a pacientului. Chiar si printre hepatologi, nu exista un consens cu privire la modul de tratare a viremiei detectate. Majoritatea medicilor sunt înclinați să creadă că ar trebui luată în considerare o sarcină mare de mai mult de 8 × 10 * 5 UI / ml. O sarcină mai mare de 1 × 10 * 7 UI / ml este considerată foarte ridicată, în timp ce o sarcină scăzută este mai mică de 4 × 10 * 5 UI / ml.

Gradul de încărcare virală indică virulența (agresivitatea) virusului: cu cât este mai mare cantitatea în sânge, cu atât mai repede se pot dezvolta complicațiile ficatului. O concentrație ridicată a virusului în sângele unei femei gravide crește probabilitatea penetrării sale prin bariera hemato-placentară la făt. Viremia afectează, de asemenea, eficacitatea tratamentului: cu un număr redus, eficacitatea terapiei este mai mare decât cea cu cele mai înalte.

Pentru a fi încrezători în exactitatea analizei PCR pentru hepatita C, este necesar să se acorde prioritate numai acelor laboratoare bine dovedite. Politica de prețuri în acest caz nu ar trebui să joace un rol primordial.

Utilizarea diagnosticului PCR

Reacția în lanț a polimerazei (PCR) în biologia moleculară este o metodă experimentală pentru detectarea virușilor. Vă permite să măriți semnificativ concentrația anumitor fragmente de acid nucleic (ADN) în probele de material biologic, ceea ce face posibilă determinarea (recunoașterea) și numărarea acestora.

Analiza este efectuată după cum urmează. Materialul genetic (o probă de sânge), care poate include și gena dorită, este introdusă în tub. Există, de asemenea, primeri - segmente sintetizate chimic, cu o lungime mică a genei dorite.

ADN sau ARN polimeraza este, de asemenea, adăugată la vas, este capabil să line up un lanț de acid nucleic care este complet identic cu originalul. Compoziția rezultată este injectată și un set de patru nucleotide libere - un material de construcții special pentru ARN sau ADN, dintre care unul conține particule radioactive de fosfor.

Amestecul rezultat este încălzit la 95-96 ° C, motiv pentru care două șuruburi ADN, care sunt în mod obișnuit împletite, sunt țesute. Apoi, medicamentul este răcit, timp în care primerii se atașează la regiunea dorită a genomului viral, împiedicând ARN-ul (sau ADN-ul) să redevină spirala dublă.

În procesul de răcire, polimeraza caută un lanț nucleotidic liber. Pentru funcționarea acestei enzime este nevoie de un singur lanț de nucleotide. Din moment ce polimeraza alunecă de-a lungul lanțului ADN (ca un inel pe o coardă), nu este capabil să lucreze pe o dublă helix.

După aceasta, se efectuează un ciclu de încălzire repetat, datorită căruia lanțurile de nucleotide sunt separate. La fiecare dintre aceste cicluri de PCR, cantitatea din eșantionul genei dorite de hepatită crește exponențial, iar restul materialului genetic este produs (crește) liniar.

După purificarea soluției din resturile de nucleotide și separarea prin electroforeză a lanțurilor ADN prin parametrul de greutate moleculară, se poate determina cu ușurință dacă există sau nu o genă dorită în proba studiată.

Beneficiile PCR

Testele de laborator utilizând PCR permit obținerea unor informații suplimentare decât prezența ARN-ului de virus. Prin determinarea parametrului nivelului radiației radioactive, este posibil să se identifice cât de mult material genetic a fost conținut inițial în proba studiată. În cazul hepatitei, determinați indicatorul nivelului încărcăturii virale.

Un alt avantaj al acestei metode este gradul foarte ridicat de sensibilitate al reacției CR. Este mult mai mare decât metodele clasice de detectare a virușilor. În mod ideal, pentru a identifica gena dorită, pentru PCR, este suficient doar un singur virus din probă.

În plus, PCR este complet specific. Primerii săi sunt proiectați astfel încât să corespundă pe deplin regiunilor unice ale genelor dorite pe care nici o altă secvență nu le are. Ca amprentele digitale sunt unice, fiecare gena are secvențe unice de nucleotide.

Analiza calitativă a PCR

Analiza calitativă relevă numai prezența virusului în sânge. Acest test trebuie efectuat pentru toți pacienții la care s-au găsit anticorpi împotriva hepatitei C. Aceasta poate avea ca rezultat numai una dintre cele două valori: "detectat" sau "nu este detectat". Într-o persoană sănătoasă, norma (valoarea de referință) trebuie să fie "nedetectată".

Există o interpretare specială a unor astfel de rezultate ale cercetării calitative:

• Rezultatul este "detectat". Aceasta înseamnă că un fragment de ARN care este specific pentru virusul hepatitei C a fost găsit în eșantionul analizat de material biologic realizat. În consecință, există un fapt că pacientul este infectat cu virusul hepatitei C. Dacă rezultatul PCR de înaltă calitate este "detectat", acest lucru indică faptul că virusul se multiplică și în acest moment infectează celulele hepatice noi în organism.
• Rezultatul nu este "detectat". Un astfel de verdict indică faptul că în proba analizată a materialului biologic obținut în acest laborator nu a fost găsit un fragment de ARN care este specific pentru virusul hepatitei C. Alternativ, concentrația ARN a infecției patogene din această probă a fost sub limita de sensibilitate a testului.

În faza acută a ARN-ului virusului hepatitei C, astfel de studii calitative prin metoda PCR pot fi detectate deja după 1-2 săptămâni imediat după infectarea organismului, cu mult înainte de apariția anticorpilor la hepatită în sine.

Rezultatele testului nereușite ale acestui studiu pot fi obținute prin:

• biomaterial contaminat;
• prezența heparinei în sângele pacientului;
• prezența în eșantion a substanțelor chimice sau proteice (inhibitori) care afectează diferitele componente ale PCR.

Pentru a efectua o analiză calitativă a PCR, nu este necesară pregătirea specială a pacientului pentru studiu. Materialul utilizat este sânge venos.

Evaluarea rezultatelor

Testele PCR de înaltă calitate au un anumit grad de sensibilitate și, în funcție de exactitatea cercetării și nivelul echipamentului din laborator poate varia de la 10 la 500 UI / ml.

Aceasta înseamnă că dacă virusul din probele de sânge este prezent la o concentrație foarte scăzută (mai mică decât pragul de sensibilitate al acestui laborator), atunci rezultatul pentru pacientul bolnav poate fi "nedetectat". Din acest motiv, atunci când efectuăm o analiză calitativă a PCR cu un nivel scăzut de viremie (concentrație scăzută a virusului), de exemplu, pentru pacienții supuși terapiei antivirale, este foarte important să se cunoască pragul de sensibilitate al acestui sistem de diagnosticare.

Variante de sisteme de diagnostic

Pentru a controla răspunsul virologic, se recomandă utilizarea sistemelor de diagnosticare cu un prag de sensibilitate de cel puțin 50 UI / ml la efectuarea tratamentului antiviral. Aceste criterii sunt îndeplinite, de exemplu, cu analizoare Cobas Ampicolor HCV-Test (cu o precizie de 50 UI / ml), precum și cu ARN HCV RealBest (cu o sensibilitate de 15 UI / ml).

Conform recomandărilor OMS, pentru a stabili un diagnostic definitiv al hepatitei C, este necesar să se bazeze doar pe baza detecției triple a ARN-ului virusului C în probele serice ale unui pacient, în absența altor varietăți de markeri hepatici.

În plus față de metodele PCR, se utilizează, de asemenea, un test TMA (metoda de amplificare transcripțională) pentru detectarea ARN-ului HCV la pacienți. Are cel mai bun prag de sensibilitate (5-10 UI / ml), dar în țara noastră o astfel de metodă de testare nu este încă foarte frecventă.

Gama de modificări detectate ale virusului

O astfel de determinare calitativă în serul prezenței ARN-ului de virus hepatitic C face posibilă determinarea mai multor genotipuri ale acestui virus. În prezent, știința cunoaște mai mult de șase genotipuri ale acestui virus, precum și aproximativ 10 subtipuri ale acestei boli.

În țara noastră, virusurile comune 1, 2, 3 genotipuri. Laboratoarele pot detecta următoarele genotipuri: 1a și 1b, 2a, 2b și 2c, precum și 3, 4, 5a și 6, indiferent de subtipuri. Pentru toate modificările de virus, specificitatea de detecție este de 100%.

Analiza cantitativă PCR

Folosind un test cantitativ PCR, se determină nivelul concentrației virusului hepatitei în probele de sânge (încărcătura virală). Acest test pentru viremia (concentrația virusului) vă permite să determinați numărul de unități dintr-un anumit material genetic (ARN-ul viral), detectat într-o anumită cantitate. În acest caz, se determină concentrația sa în 1 ml, care corespunde cu 1 cu. cm.

Parametrii de analiză cantitativă sunt exprimați în cifre, în acest scop fiind utilizate ca unități de măsură unitățile internaționale (UI) pe mililitru (ml), denumite UI / ml. Acum, în unele laboratoare, cantitatea de virus poate fi determinată în alte unități: numărul de copii pe ml este indicat ca copii / ml.

• Date pentru hepatita C, o astfel de analiza cantitativa a PCR se face imediat inainte de inceperea tratamentului. Apoi, în săptămânile 1, 4, 12 și 24. Evaluarea din săptămâna a 12-a este orientativă, permite determinarea eficacității terapiei.
• Pregătirea pentru analiză. Pentru a efectua o analiză cantitativă a PCR, nu este necesară pregătirea specială a pacientului pentru studiu. Cu jumătate de oră înainte de eșantionare nu ar trebui să fumeze. Sângele venos este folosit ca material de laborator.

Evaluarea rezultatelor

Pentru diferite sisteme de testare de laborator, există factori de conversie diferiți pentru acest indicator în UI / ml. În medie, aceștia iau parametrul de conversie, în care 4 copii / ml = 1 UI / ml. De exemplu, dacă laboratorul dă rezultatul analizei PCR 2,4 * 10 6 copii / ml, atunci acest parametru ar trebui împărțit în 4 și vom obține 6 * 10 5 UI / ml.

O sarcină de 800.000 UI / ml este considerată ridicată, care corespunde aproximativ la 3.000.000 copii / ml. Viremia scăzută, conform unor autori, corespunde parametrilor PCR cantitativi sub 400.000 UI / ml.

Ca urmare a testului cantitativ, rezultatele finale pot fi livrate nu sub forma unei valori digitale, ci: "sub gama de masurare" sau "nedetectata".

• Evaluare: "sub gama de măsurare." Acest lucru indică faptul că testul cantitativ nu a reușit să detecteze ARN-ul viral al hepatitei C, cu toate acestea, virusul în sine este prezent în organism în concentrații foarte scăzute. Acest lucru este evidențiat de testul de calitate suplimentară, care confirmă prezența virusului.
• Evaluare: nu a fost detectat. Acest rezultat arată că testul cantitativ nu se găsește în virusul ARN-ului de probă.

Parametrul încărcăturii virale determină, în primul rând, gradul de infecție al bolii, nivelul de "infecțiozitate" al pacientului. Cu cât este mai mare concentrația de virus a pacientului, cu atât este mai mare probabilitatea de a le transmite altor persoane. De exemplu, în timpul actului sexual cu o persoană bolnavă sau pe verticală. Acest indicator cantitativ ajută și la determinarea eficacității tratamentului pacientului.

Efectuarea unei analize cantitative a PCC este importantă pentru terapia antivirală, evaluarea succesului și planificarea duratei cursului. Astfel, cu un răspuns rapid al organismului la tratament și un grad scăzut de viremie, durata terapiei poate fi redusă.

Dacă parametrul cantitativ PCR este redus încet, terapia antivirală trebuie extinsă sau modificată. Dacă nivelul încărcăturii virale este scăzut, atunci acesta este un factor favorabil în terapie, dacă este crescut, atunci metoda folosită este ineficientă și medicamentele sau metodele de utilizare a acestora trebuie schimbate.

Analiza calitativă și cantitativă a PCR pentru hepatita C: negativ, pozitiv, transcript

Hepatita C este o boală hepatică virală provocată de virusul flaviviral HCV (din virusul hepatitei C din engleză), structura căruia conține o moleculă de acid ribonucleic (ARN). ARN poartă codul genetic al virusului. Prezenta sa permite analiza PCR pentru hepatita C.

Pericolul VHC pentru o persoană constă în faptul că așa-numita fereastră serologică (timpul dintre infecție și apariția unei reacții din partea sistemului imunitar) poate fi destul de lungă - de la câteva săptămâni la șase luni.

Nu detectează infecția și nu începe tratamentul la timp.

În funcție de caracteristicile individuale ale organismului, purtătorul de HCV se poate manifesta într-o formă acută și poate să apară ca o boală cronică care va necesita tratament lung și costisitor. În detectarea anticorpilor la HCV, se efectuează o serie de teste de laborator, incluzând PCR pentru hepatita C. Acest test se efectuează tuturor persoanelor în ale căror anticorpi sanguine a fost detectată HCV.

Ce este analiza PCR?

Analiza de laborator a PCR pentru hepatita C - studiu al materialului biologic pentru identificarea prezenței virusului flava.

Reacția în lanț a reacției polimerazice (așa cum este reprezentată de abrevierea) prezintă valoarea cantitativă a afectării virale a corpului, caracteristicile sale calitative, precum și genotipul virusului care conține ARN.

Pe baza lor, precum și pe baza unor analize suplimentare, se determină metoda și durata terapiei, precum și factorul epidemiologic (gradul de risc de transmitere către un alt purtător).

Ce este analiza ARN-ului hepatitei C?

Hepatita C PCR se mai numește și analiza ARN (ARN HCV), deoarece Flavavirusul conține o particulă de ARN cu o dimensiune a virionului de 30-60 nm. Una dintre caracteristicile acestui microorganism este o înclinație mare pentru mutații.

Fiecare dintre subspecii (genotipuri) ale virusului are o rezistență diferită, care determină diferite metode de tratament și natura prognozei ulterioare pentru pacient.

Materialul biologic (sânge venos) este administrat pe stomacul gol și, de regulă, este testat prin metoda Real-Time PCR (diagnostic extrem de sensibil în timp real, cu o limită de detecție mai mică de 15 UI / ml, folosind sisteme automate închise).

Există și alte teste, de exemplu COBAS AMPLICOR cu o sensibilitate de 50-100 UI / ml. Pentru orice încercare de laborator, pragul de sensibilitate este important, adică capacitatea reactivului de a detecta concentrația minimă de virus în materialul biologic.

Tipuri de analiză pentru hepatita C prin PCR

Hepatita C PCR include trei componente importante:

• analiza calitativă;
• analiza cantitativă;
• genotipare.

Aceste teste pot determina natura viremiei, precum și caracteristicile genetice ale agentului patogen. În funcție de sensibilitatea sistemului de diagnosticare, studiul se efectuează o dată și, uneori, se efectuează un al doilea test cu un reactiv mai sensibil pentru confirmarea sau rafinarea rezultatelor.

HCV de înaltă calitate PCR

Analiza calitativă a PCR pentru hepatita C este un alt nume comun pentru analiza reacției în lanț a polimerazei. Sensibilitatea standard a testului, care permite detectarea prezenței leziunilor virale, se situează în intervalul 10-500 UI / ml.

O analiză PCR negativă pentru hepatita C arată că concentrația virusului din sângele pacientului este sub pragul de susceptibilitate al sistemului de diagnosticare.

Dacă PCR de înaltă calitate a dat răspunsul "nu este detectat", atunci pentru tratamentul ulterior este important să se determine pragul de sensibilitate al reactivului.

Fracțiile de proteine ​​la flavavirus apar mult mai târziu.

Hepatita C PCR cantitativă

Hepatita C PCR cantitativă este un indicator al încărcăturii virale, care reflectă nivelul concentrației ARN-ului flavavirus în organism. Acesta este un indicator care arată cât de multe fragmente de ARN virale sunt conținute pe centimetru cub de sânge. PCR de hepatita C ARN rezultate ale testelor cantitative în sistemul convențional sunt indicate în unități internaționale per ml (UI / ml) și pot fi înregistrate în diferite moduri, de exemplu - 1,7 ppm sau 1.700.000 UI / ml.

Diagnosticul PCR cantitativ al pacienților cu hepatita C atribuite inainte de inceperea tratamentului antiviral, iar la 12 saptamani de tratament, pentru a evalua rezultatele metodei selectate pentru tratarea HCV. Sarcina virală permite determinarea a trei indicatori importanți ai bolii:

• infecțiozitate, adică gradul de risc de transmitere a virusului de la un purtător la altul (cu cât este mai mare concentrația ARN-ului flavavirus, cu atât este mai mare probabilitatea de a infecta o altă persoană, de exemplu, prin contact sexual);
• metoda și eficacitatea tratamentului;
• durata și prognoza terapiei antivirale (cu cât este mai mare încărcătura virală, cu atât durează mai mult tratamentul).

Diagnosticarea cantitativă PCR a hepatitei C depinde de tipul de test de laborator și de pragul sensibilității sale. Limita inferioară a normei este considerată a fi indicatorul până la 600.000 UI / ml, valoarea medie fiind în intervalul 600.000-700.000 UI / ml. Rezultatele a 800.000 UI / ml și mai sus sunt considerate nivele ridicate de virus care conține ARN.

genotipare

Datorită activității de mutație înaltă a VHC în natură, atunci când se testează, este important să se identifice care este genotipul virusului în sângele pacientului. În total, pe planetă au fost înregistrate 11 genotipuri ale virusului hepatitei C, care includ multe subtipuri (subtipuri). Pe teritoriul Federației Ruse au distribuit 1,2 și 3.

Hepatita C PCR ARN împreună cu genotiparea este o componentă foarte importantă a analizei, deoarece permite medicului să determine rezistența (rezistența) virusului, să selecteze medicamentele corespunzătoare și să prescrie un curs de tratament.

De asemenea, genotiparea permite determinarea indirectă a stării ficatului. De exemplu, genotipul 3 al VHC este adesea însoțit de steatoză, în care se acumulează grăsime în celulele organului.

Un test de sânge pentru PCR pentru hepatita C ar trebui să producă o cifră care să determine genotipul. Răspunsurile la laborator pot spune că nu sunt tastate - ceea ce înseamnă că un virus este în sânge uman, care nu este detectat de sistemul de testare. Acest lucru poate indica faptul că genotipul nu este tipic pentru o anumită zonă geografică. În acest caz, trebuie să repetați analiza cu o sensibilitate mai mare a sistemului de diagnosticare.

Decodificarea analizei PCR pentru hepatita C

Testul pentru decriptarea cantitativă PCR a hepatitei C se poate baza pe datele de mai sus. La obținerea rezultatelor testelor de laborator, în mod obișnuit sunt scrise următoarele date:

• "Găsit" / "nu a fost găsit" (PCR de înaltă calitate pentru hepatita C);
• numărul de fracțiuni care conțin ARN, de exemplu 831,680 ME / ml (analiză PCR cantitativă);
• cifra care determină genotipul VHC, de exemplu - 1, 2, 3, 4;
• Numele testului este cel mai adesea în timp real.

Cel mai important lucru în descifrarea analizei PCR pentru hepatita C este cel de-al doilea element, care arată încărcarea virală, care determină prognosticul, metoda și durata tratamentului.

Dacă testul PCR pentru hepatita C este negativ și testul ELISA este pozitiv - ce înseamnă acest lucru?

Pentru a descifra testele de laborator, este important să contactați un specialist în hepatologie sau o boală infecțioasă care va explica informațiile obținute în conformitate cu tipul de sistem de diagnosticare și pragul său de sensibilitate. În practica medicală, există multe date ale testelor de sânge care pot induce în eroare o persoană fără studii medicale.

De exemplu, dacă testul ELISA HCV PCR negativ și pozitiv, poate indica faptul că în acest moment în sângele pacientului nu este VHC, dar inainte de a suferit o formă acută de hepatită C. Se consideră că, pozitiv legat testul immunosorbent (ELISA) arată că există anticorpi în sânge care au fost produși după invazia virusului în trecut. Dar în practica medicală modernă, analiza ELISA este considerată a fi insuficient de fiabilă și adesea dă rezultate atipice, astfel încât medicii să o folosească ca screening primar. Atunci când se diagnostichează o boală, specialiștii sunt ghidați tocmai prin teste PCR.

Videoclip util

Următorul videoclip descrie într-un mod foarte detaliat și interesant care este esența metodei PCR, cum este efectuată analiza:

concluzie

Pentru analiza PCR a hepatitei C, se ia de obicei sânge venos. Cel mai adesea există un aport dublu de material biologic - pentru ELISA și direct pentru testul PCR. Pentru rezultate corecte de testare este necesară respectarea regulilor de bază pentru colectarea în laborator a materialului biologic:

• sânge pentru analiză este dat în prima jumătate a zilei pe stomacul gol;
• între masă și recoltarea sângelui ar trebui să dureze cel puțin 8 ore;
• De asemenea, alcoolul și alimentele prajite ar trebui să fie excluse înainte de efectuarea testului.
• în timpul zilei înainte de donarea de sânge este necesar să se evite efortul fizic ridicat.

Rezultatele testelor de sânge sunt, de obicei, pregătite a doua zi.